الكلوروفيل هو صبغة خضراء توجد في النباتات العليا وجميع الكائنات الحية الأخرى التي تقوم بعملية التمثيل الضوئي. الكلوروفيل أ والكلوروفيل ب قابلان للذوبان في الإيثانول والإيثر والأسيتون والمذيبات الأخرى ، غير قابل للذوبان في الماء وإيثر البترول ، لذلك يمكن استخدام المذيبات القطبية مثل الأسيتون والميثانول والإيثانول وخلات الإيثيل وما إلى ذلك لاستخراج الكلوروفيل.
عملية استخلاص الكلوروفيل:
يتم تحضير استخلاص الكلوروفيل في غرفة شبه مظلمة بدرجة حرارة 25 مئوية. خطوات الاستخلاص كالتالي:
(1) خذ 1000 جرام من الأوراق الخضراء الطازجة وسحقها في Wechsler.
(2) ضع 1000 جرام من الأوراق الخضراء المسحوقة في الأسيتون بكمية صغيرة من كربونات الكالسيوم (درجة حرارة 20 درجة) لاستخراجها ، حتى تصبح شظايا الأوراق عديمة اللون بعد الترشيح والتنظيف.
(3) ضع مستخلص الأسيتون المصفى في قمع يحتوي على 1 لتر من الإيثر البترولي و 100 مل من الأسيتون ، ثم قم بتدويره برفق ، مع إضافة الماء المقطر حتى يصبح طبقيًا. يتم التخلص من معظم الأسيتون والشوائب القابلة للذوبان في الماء في طبقة الماء ، تاركًا محلول الأثير البترولي فقط.
(4) بعد تنقية محلول الإيثر البترولي مرة أخرى بالماء المقطر ، يتم تنظيفه أكثر من 5 مرات باستخدام 2 0 0 مل من محلول ميثانول بنسبة 80 في المائة يحتوي على الإيثر البترولي و 0.01 جم من حمض الأكساليك ، وفي النهاية يتم الحصول على معلق أصفر وأخضر .
(5) جفف المعلق بكبريتات الصوديوم اللامائية ، ثم رشه في عمود مصنوع من مسحوق سكروز بسمك 3 سم. ثم نظف الأصباغ المترسبة لإزالة الكاروتينات وجعلها تحتوي فقط على الكلوروفيل الطبيعي.
(6) عمود السكروز الذي يحتوي على الكلوروفيل الطبيعي مقسم إلى طبقتين ، الطبقة الخضراء بها 4-10 طبقة كلوروفيل ب ، والطبقة الزرقاء الأخرى 2-6 طبقة كلوروفيل أ.
(7) يتم وضع الجزء الموجود في منتصف الطبقة الزرقاء (حوالي نصف الطبقة الزرقاء) في الأثير ، ويتم ترشيح المعلق واستخلاصه ، وتنظيفه بالماء المقطر ، وتجفيفه بكبريتات الصوديوم ، وتصفيته بأواني للحصول على الكلوروفيل أ.
(8) قم بإزالة الجزء الأوسط من الطبقة الخضراء في (6) ، ثم ضعه بسرعة في الأثير للترشيح والغسيل لعمل محلول أثير الكلوروفيل ب.
كيف تنفصل أثناء الاستخراج؟
يعتبر اللوني طريقة مهمة لفصل وتنقية وتحديد المركبات العضوية ، وخاصة في التحليل الدقيق ويستخدم على نطاق واسع. تشمل أصباغ الفاكهة والخضروات بشكل أساسي الكاروتين القابل للذوبان في الدهون واللوتين والكلوروفيل والأنثوسيانين القابل للذوبان في الماء. في تجارب الاستخراج ، يمكننا الاستفادة من مبدأ ترشيح الأنثوسيانين القابل للذوبان في الماء المماثل للامتزاج ، والذي بدوره يمكن أن يستخدم كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، كروماتوجرافيا العمود ، كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) لفصل بيتا كاروتين ، لوتين والكلوروفيل ، الضعيف بسبب قطبية الأنواع الثلاثة من الصباغ ، يمكن اختياره بشكل مناسب مذيب عضوي واحد أو نسبة مختلفة من المذيب المختلط كعامل تمدد وعامل شطف ، وقد تم تحديد ظروف الفصل المثلى.
